文章来源:https://www.lanqiaopf.com/ 作者:未知 发布时间:2021-11-01 浏览次数:187
微生物实验室时进行核酸检测时需要有严格的规范流程进行操作,做实验室操作时要注意不要影响实验室试剂的使用,在进行核酸检测时,流程相对比较复杂,但是每一个过程都需要严格地进行。这一点是样品处理时要注意操作的时间和试剂含量,这些都需要规范操作。那么具体的步骤有哪些呢?让我们来一起了解一下吧。
用1.5ml的无菌EP管,移液器移取560μl AVL裂解液,加入5.6μl Carrier RNA,加入140μl的已灭活的待提取核酸的待测样本,涡旋振荡15s,室温静止10min。将上述EP管放入离心机内瞬时离心以去除可能残留在EP管盖上的裂解产物,防止污染。裂解完成后,加入560μl无水乙醇,振荡混匀15s,将上述EP管放入离心机内瞬时离心以去除可能残留在EP管盖上的裂解产物,防止污染。
微生物实验室在进行检测时向离心柱加入裂解产物630μl,8000转离心1min,若离心机在生物安全柜之外,每次使用都需进行外表面消毒。更换新废液收集管,要从离心机中小心取出离心柱,将上层离心柱转移到新收集管中,继续将剩余裂解产物630μl加入离心柱中,若样本体积大于140μl时需重复此步骤,直到全部裂解产物都过柱离心,8000转离心1min,小心将离心柱转移到新的收集管中。
取500μl AW1加入离心柱中(注意,此处加样操作时务必将移液器吸头接触离心柱内壁缓慢加样),8000转离心1min。小心取出离心柱,更换新的收集管。
取500μl AW2加入离心柱中,14000转离心3min,小心取出离心柱,更换新的离心柱上端收集管,置于离心机中使用较大转速离心1min,以确保将AW2中的残液完全离心干净。
然后,取无菌1.5mlEP管收集核酸,将离心柱上端小心放入1.5mlEP管中,取40-60μl的洗脱液AVE加入到离心柱中(注意:洗脱液应尽量全部覆盖住离心柱膜),用EP管管盖盖住离心柱,使用无菌剪刀剪去原离心柱管盖。
操作完成后将在室温温度下静止1min,将其放入离心机中8000转离心1min,回收核酸。丢弃离心柱,EP管中即为获取的提取核酸,做好标记与登记。
以上就是微生物实验室在检测样本时裂解的步骤具体描述,从上面的描述可以看出这一过程的严格和规范,在试样裂解过程中要注意时间的控制。避免在一个步骤中出现导致样品损坏。
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